Isolation and regeneration of transiently transformed protoplasts from gametophytic blades of the marine red alga Porphyra yezoensis

Despite the recent progress of transient gene expression systems in a red alga Porphyra yezoensis by particle bombardment, a stable transformation system has yet to establish in any marine red macrophytes. One of the reasons of the difficulty in genetic transformation in red algae is the lack of systems to select and isolate transformed cells from gametophytic blades. Thus, toward the establishment of the stable transformation system in P. yezoensis, we have developed a procedure by which transiently transformed gametophytic cells were prepared from particle bombarded-gametophytic blade as regeneratable protoplasts. Using mixture of marine bacterial enzymes, yield of protoplasts was high as reported elsewhere; however, these protoplasts did not develop. In contrast, protoplasts prepared from gametophytes treated with allantoin were normally developed, in which the overexpression of a â-glucuronidase reporter gene had no effect on the regeneration of protoplasts. Therefore, the use of allantoin in protoplast preparation sheds a new light on the realization of an efficient isolation and selection of study transformed cells from gametophytic blades.

Formación y regeneración de protoplastos de phaffia rhodozyma / Formation and regeneration of phaffia rhodozyma protoplasts

En este trabajo se describe la preparación y regeneración de protoplastos a partir de cultivos frescos de la levadura carotenogénica phaffia rhodozyma, en forma eficiente y con un alto grado de rendimiento en la sobrevida de las células tratadas. Para ello se han realizado una serie de experimentos para formar protoplastos de p.rhodozyma, utilizando tres cepas silvestres y cinco cepas afectadas en carotenogénesis. Se probó las enzimas bioglucanasa, biocelulasa, bioxilanasa, glucoronidasa, zimoliasa 100T, lisozima y novozima 234, encontrándose que novozima 234, es la que tiene mayor eficiencia. En las cepas silvestres UCD 67-210 y UCD 67-385 y las cinco cepas de color, se logra un 100 porciento de protoplastos entre 60 a 90 minutos de tratamiento con novozima a 37ºC. Sin embargo, no fue posible formar protoplastos en ninguna de las condiciones estudiadas con las cepas silvestres UCD 67-383. Tales resultados pueden ser devidos a diferencias en la pared celular entre dichas cepas. Además, se ha observado que la incubación a 37ºC reduce notablemente la sobrevida de las células tratadas. Para la formación y regeneración de protoplastos se utilizó una serie de condiciones, encontrando que un sorbitol 0.2 M la destrucción de las células es menor que a concentraciones de sorbitol 0.8 y 1 M. Sin embargo, el medio más adecuado para la formación y regeneración de los protoplastos debe contener KC1 0.8 M como agente osmolar, manteniendo la isotonía del medio y logrando que la destrucción celular sea menor

Control of morphogenesis in tobacco protoplast cultures: organogenesis vs embryogenesis.

The morphogenetic pathway leading to plant differentiation in tobacco mesophyll protoplasts could be regulated. The course of development via organogenesis or embryogenesis was controlled by manipulating nutrient media, culture conditions and hormone requirements. A lowering of molarity of medium after 5 weeks of protoplast culture, inclusion of GA3 (0.5 mg/l) in the medium for first 8 weeks of culture and exclusion of reduced nitrogen in the medium resulted in shoot organogenesis, while maintenance of higher molarity of the medium till 8 weeks, reduced nitrogen in the medium and removal of 2, 4-D after 5 weeks of culture induced embryogenesis. Regenerability of viable plants was obtained by both developmental pathways. The implications of tobacco embryogenesis system in plant molecular genetics were highlighted.

Formación y regeneración de protoplastos de una cepa nativa de Clostridium acetobutylicum / Formation and regeneration of protoplasts from a native strain of Clostridium acetobutylicum

Se modificó un método para la formación y regeneración de protoplastos en una cepa nativa de Clostridium acetobutylicum. Los protoplastos se obtuvieron por tratamiento con lisozima en una solución hipertónica y se regeneraron en un medio sólido hipertónico y enriquecido. La frecuencia de reversión a la forma bacilar obtenida se encuentra entre 10 y 15%